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SVEA C4液相色譜柱在使用前,請*行柱的性能測試
  • 發(fā)布日期:2022-12-26      瀏覽次數(shù):2135
    •   SVEA C4液相色譜柱是一款適合于蛋白質(zhì)分離分析用的產(chǎn)品。它使用3微米粒徑的硅膠填料,優(yōu)化了孔徑,固定相配體的烷基鏈長及表面鍵合密度,可實(shí)現(xiàn)高分辨率和高回收率的分析。使用短柱可以在高流速下實(shí)現(xiàn)快速分析。
       
        SVEA C4液相色譜柱在使用前,*行柱的性能測試,并將結(jié)果保存起來,作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。
        在做柱性能測試時(shí)要按照出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行,只有這樣,測得的結(jié)果才有可比性。但要注意柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。
        1、樣品的前處理:
       ?、傧仁褂昧鲃酉嗳芙鈽悠?;
       ?、谑褂妙A(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì);
        ③使用0.45μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。
       
        2、流動相的配制:
        液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動相具備以下的特點(diǎn):
       ?、倭鲃酉鄬悠肪哂幸欢ǖ娜芙饽芰?,保證樣品組分不會沉淀在柱中;
       ?、诹鲃酉嗯c樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng);
       ?、哿鲃酉嗟酿ざ纫M量小,以便得到好的分離效果;降低柱壓降,延長泵的使用壽命;
        ④流動相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器,最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制;
        ⑤流動相沸點(diǎn)不要太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行;
       ?、拊诹鲃酉嗯渲坪煤螅欢ㄒM(jìn)行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測,還可以防止流動相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
       
        3、流動相流速的選擇:
        因柱效是柱中流動相線性流速的函數(shù),使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的SVEA C4液相色譜柱,要追求較佳柱效,使用較佳流速。對內(nèi)徑為4.6mm的SVEA C4液相色譜柱,流速一般選擇1ml/min,對于內(nèi)徑為4.0mm柱,流速0.8ml/min為佳。
        當(dāng)選用較佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長??刹捎酶淖兞鲃酉嗟南礈鞆?qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間。
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